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本制品是基于Histan II Reverse Transcriptase开发的反转录试剂盒。与Hiper M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比，Histan II Reverse Transcriptase热稳定性大幅度提高，可耐受高达50℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Histan II Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10kb的cDNA。

本试剂盒中包含由总RNA或mRNA合成高质量第一链cDNA所需的所有成分，并提供两种cDNA合成引物：Random Primers N6和oligo (dT)₁₈，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。

• 反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
  
• 本制品仅作科研用途！

• 反转录反应体系配制（20μL体系）
  

  成分	用量
  RNase-free H2O	至20μL
  Total RNA 或mRNA	1ng～5μg* 1ng～500ng*
  5×Histan II Buffer	4μL
  Random Primers N6 (50μM) 或Oligo (dT)18(50μM) 或Gene Specific Primers (2μM)	1μL
  Histan II Enzyme Mix	2μL

  
  可选步骤：若后续实验为PCR，针对复杂模板，可将RNA、H2O、反转录引物在65℃孵育5min后，迅速冰上冷却，然后再加入Histan II Enzyme Mix；若后续实验为qPCR，则可省略65℃孵育步骤，直接在体系中加入Histan II Enzyme Mix。
  注^*：若后续实验为qPCR，建议Total RNA或mRNA投入量不超过1μg或100ng，如果目的基因的表达丰度非常低，最多可投入5μg Total RNA或500ng mRNA。
  
• 反转录程序设置

  温度	时间
  25℃	5min
  42℃	30min
  85℃	5min

  注：
  
  • 荧光定量实验可以只使用Random Primers N6；也可以1:1与Oligo (dT)18混合使用，效果更好。
    
  • 逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到50℃。
    
  • 逆转录产物可以-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。

• 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT)18，与真核生物mRNA的3' Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
  
• 原核生物RNA的反转录请选用Random Primers N6或者基因特异性引物。
  
• Random Primers N6适用性较广，mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板均可用Random Primers N6进行反转录。
  
• 使用Random primers N6，进行2kb以下的cDNA合成时，Random primers N6的使用量为1～2μL；2kb以上的cDNA合成时，Random primers N6的使用量为0.4～1μL。